非黑腹果蝇基因编辑
非黑腹果蝇基因编辑的难点在于:
1)最佳饲养条件与黑腹果蝇不尽相同,导致常规的饲养条件下,果蝇生长状态较差;
2)基因编辑效率不确定;
3)没有balancer工具果蝇,获得阳性之后,较难做成纯合品系。
针对这些技术难点,芳景生物逐一进行了攻克:
1)开发了多种配方的食物,以便针对不同果蝇品种进行最佳饲养条件的摸索;
2)研发了效率较高的cas9样品,并通过优化gRNA设计方案,整体提高了CRISPR基因编辑效率;
3)建立了一套完整高效的鉴定杂交方法,缩短了项目成本和项目周期,与传统的杂交方法相比,可以更加方便快速的获得纯合品系。
芳景生物目前在simulans,yakuba,virilis等多个非黑腹果蝇物种中,均获得了CRISPR基因编辑成功的纯合品系。推荐客户采用indel的方案(如图1),对目的基因进行移码突变。
图1. CRISPR indel示意图